Gluconeogeneza se desfășoară predominant în ficat și rinichi. Aceasta suplinește necesitatea de glucoză plasmatică între mese.
Gluconeogeneza este stimulată de hormonii diabetogenici precum glucagonul, hormonul de creștere, epinefrina și cortizolul. Substraturile gluconeogenetice includ glicerolul, lactatul, propionatul și anumiți aminoacizi.
Gluconeogeneza este definită ca o sinteză de novo din precursori nonhexozici. Aceasta nu include conversia fructozei și a galactozei in glucoză la nivelul ficatului sau generarea glucozei din glicogen prin glicogenoliză.
Gluconeogeneza survine în timpul înfometărilor și după un prânz bogat în grăsimi și proteine fără carbohidrați. Aceasta este în esență o glicoliză în sens invers.
Din cele 10 reacții care constituie gluconeogeneza, șapte sunt comune cu glicoliza. Aceste reacții au ΔG cu valoare aproximativ egală cu 0, așadar ușor reversibile. Ireversibilitatea căii glicolitice este conferită de 3 reacții puternic exergonice și care nu pot fi folosite în procesul de gluconeogeneză. Aceste etape sunt catalizate în proces de enzime specifice acestor pași ireversibili.