Spectrofotometria este o ramură a spectroscopiei care permite măsurarea transmisiei și reflexiei, proprietăți ale materialelor sau substanțelor, ținând cont de lungimea de undă.
Aparatele folosite se numesc spectrofotometre dacă se utilizeaza monocromatoare pentru selectia lungimii de unda a radiatiei si respectiv fotometre daca se utilizeaza filtre colorate.
Instrumentele permit analiza calitativă și cantitativă a compușilor, ținând cont de cantitatea de lumină absorbită de compușii colorați.
Cel mai frecvent fotometrele analizează radiații din domeniile de radiații UV (ultraviolet), VIS (vizibil), IR (infraroșu), dar aparatele moderne fac posibile cercetări inclusiv în lungimi de undă cu raze X și microunde.
Principiul de funcționare al fotometrului Eppendorf
- Se utilizează filtre colorate care permit selecții de lungimi de undă specifice (fotometre)
- Radiația inițială (incidentă) străbate cuva cu substanță de analizat, iar radiația transmisă este analizată de un fotodetector, fiind transformată într-o mărime electrică, ce se amplifică în vederea afișării;
Principiul spectofotometriei UV/VIS se bazează pe legea Lambert- Beer, ce indică directa dependență dintre mărimea măsurată (extincție/densitate optică/absorbanță) și concentrația probei analizate.
Mod de lucru
- Aparatul se conectează la o sursă de curent electric
- Se deschide capacul aparatului
- Aparatul se pune în funcțiune apasând butonul de pornire
- Se introduce filtrul colorat recomandat pentru testarea respectivă
- Se introduce proba blank pentru a seta aparatul la zero
- Se închide capacul aparatului, iar cu ajutorul butonului de reglare, se calibrează aparatul
- Se introduce în aparat proba de analizat
- Se închide capacul aparatului și se citește rezultatul afișat pe scala extincțiilor